这篇文章给大家聊聊关于提取rna的方法，以及trizol法提取rna步骤对应的知识点，希望对各位有所帮助，不要忘了收藏本站哦。

本文目录

1. 提取dna和rna的方法
2. RNA提取过程中的关键步骤及注意事项有哪些
3. RNA提取步骤是什么
4. RNA提取原理
5. RNA提取过程中有哪些关键步骤及注意事项

一、提取dna和rna的方法

提取DNA和RNA的方法包括以下步骤：

1.细胞裂解：使用化学或物理方法裂解细胞，释放出其中的DNA和RNA。

2.去除蛋白质：使用蛋白酶K和苯酚等试剂去除裂解液中的蛋白质。

3.沉淀DNA和RNA：在裂解液中加入乙醇或异丙醇等沉淀剂，使DNA和RNA沉淀。

4.洗涤和干燥：用75%的乙醇洗涤沉淀，去除残留的蛋白和盐分，然后用无水乙醇干燥沉淀。

5.溶解DNA和RNA：将沉淀用适量的TE缓冲液或水溶解DNA和RNA。

这些步骤可以提取出细胞中的DNA和RNA，以便进行后续的分子生物学实验。

二、RNA提取过程中的关键步骤及注意事项有哪些

细胞中的RNA主要有三类：rRNA约占80％－85％，tRNA和核内小分子RNA约占10%-15%，mRNA约占1%-5%，由于rRNA占绝大多数，因此我们用琼脂糖凝胶电泳可以看到的即是rRNA，它也有三种类型：28S，18S，5S。所以我们看到的也应该是三条带，而且28S的亮度为18S的两倍。这样的RNA才可以用来建库。

在RNA的提取时，一定要注意RNase的污染，因RNA极易被RNase的降解，操作时应尽量少说话，并在洁净的环境中操作，主要防止手、唾液和空气中Rnase的污染；另一方面使用的所有玻璃仪器、移液器、吸头和离心管都用0.5%DEPC溶液处理过夜,然后高压灭菌15分钟.但对于灭菌的一次性使用的塑料制品基本上无RNase,，可以不经处理直接用于提取RNA，实验室用的普通玻璃器皿和塑料制品经常有Rnase污染，使用前必须180度干烤8小时或更长时间（玻璃器皿）或用氯仿冲洗（塑料制品），另外，由于材料不同，机体内含有的糖、酚类物质不一样，因此材料不同用的方法也应该不一样。

下面是两种提取方法，第一种适用于嫩组织或动物组织的总RNA的提取，第二种适用于老组织的提取。

试剂：提取缓冲液，KAc(5M),异丙醇，无水乙醇，DEPC水

仪器：离心机，恒温水浴锅，研钵

方法一动物、植物（嫩叶）的总RNA分离

大约2克植物组织或动物组织用液氮研磨

取上清，加入等体积的异丙醇，15-30度放置10分钟。

弃上清，加入10ml75%洒精洗沉淀。

方法二、植物老叶、老根或多糖含量高的材料的总RNA分离

1g组织液氮研磨，加入6ML提取缓冲液

取上清，加入0.6倍异丙醇，-20℃，1小时（或室温15-20min）

12000rpm,4℃,5min,上清即为RNA。

三、RNA提取步骤是什么

基于我在读研阶段收集组织标本并从中提取RNA的经验，在术中切除的组织需要立即放入RNA保护液并液氮保存，之后用trizol法液氮研磨提取，基本能保证比较好的RNA质量，如果样本离体以后没有及时置入液氮，则很难保证RNA的质量，你应该知道内源性RNA酶是什么，石蜡切片样本做做免疫组化还可以，提取RNA有点太困难了，一般来说芯片都是用新鲜组织或者细胞做的，从石蜡切片里做能不能有结果另说，肯定会有reviewer质疑的

四、RNA提取原理

RNA抽取一般使用Trizol法抽提:Trizol是一种总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞，抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。Trizol作用原理:在匀质化或溶解样品中，Trizol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后，裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。水相转移后，RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后，用乙醇可从中间相沉淀得到DNA，加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。

五、RNA提取过程中有哪些关键步骤及注意事项

细胞中的RNA主要有三类：rRNA约占80％－85％，tRNA和核内小分子RNA约占10%-15%，mRNA约占1%-5%，由于rRNA占绝大多数，因此我们用琼脂糖凝胶电泳可以看到的即是rRNA，它也有三种类型：28S，18S，5S。所以我们看到的也应该是三条带，而且28S的亮度为18S的两倍。这样的RNA才可以用来建库。在RNA的提取时，一定要注意RNase的污染，因RNA极易被RNase的降解，操作时应尽量少说话，并在洁净的环境中操作，主要防止手、唾液和空气中Rnase的污染；另一方面使用的所有玻璃仪器、移液器、吸头和离心管都用0.5%DEPC溶液处理过夜,然后高压灭菌15分钟.但对于灭菌的一次性使用的塑料制品基本上无RNase,，可以不经处理直接用于提取RNA，实验室用的普通玻璃器皿和塑料制品经常有Rnase污染，使用前必须180度干烤8小时或更长时间（玻璃器皿）或用氯仿冲洗（塑料制品），另外，由于材料不同，机体内含有的糖、酚类物质不一样，因此材料不同用的方法也应该不一样。下面是两种提取方法，第一种适用于嫩组织或动物组织的总RNA的提取，第二种适用于老组织的提取。试剂：提取缓冲液，KAc(5M),异丙醇，无水乙醇，DEPC水仪器：离心机，恒温水浴锅，研钵方法一动物、植物（嫩叶）的总RNA分离大约2克植物组织或动物组织用液氮研磨↓加5mlTrizol裂解液↓12000rpm，4度，10分钟↓加入1ml氯仿↓剧烈振荡15秒，室温温育2-3分钟↓室温离心10分钟，8000rpm↓取上清，加入等体积的异丙醇，15-30度放置10分钟。↓12000g离心10分钟↓弃上清，加入10ml75%洒精洗沉淀。↓2-8度下，不超过7500g离心5分钟↓弃上清，干燥沉淀10分钟↓用DEPC水溶。方法二、植物老叶、老根或多糖含量高的材料的总RNA分离1g组织液氮研磨，加入6ML提取缓冲液↓2min振荡↓65℃，20min↓加入1.5MLKAc↓混匀，冰浴20min↓8000rpm,4℃,15min取上清，加入0.6倍异丙醇，-20℃，1小时（或室温15-20min）↓12000rpm,4℃,15min↓75%乙醇，12000rpm,20℃,5min↓晾干，溶60ulDEPC水，15min↓12000rpm,4℃,5min,上清即为RNA。

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