dna提取方法(酚氯仿法提取dna原理)
本篇文章给大家谈谈dna提取方法,以及酚氯仿法提取dna原理对应的知识点,文章可能有点长,但是希望大家可以阅读完,增长自己的知识,最重要的是希望对各位有所帮助,可以解决了您的问题,不要忘了收藏本站喔。
本文目录
一、dna提取过程及原理
1、dna提取过程是通过破坏细胞膜和核膜,释放出细胞核内的dna分子。
2、首先,细胞被加入洗涤缓冲液中破裂,释放细胞内容物。
3、然后,通过加入蛋白酶消化蛋白质,去除dna周围的蛋白质。
4、接着,使用盐溶液沉淀dna,再经过酒精洗涤和干燥步骤,最终得到纯净的dna溶液。
5、这个过程的原理是利用化学和物理方法来破坏细胞结构,从而释放和提取dna分子。
二、DNA提取方法
1、一.酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎细胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb
2、二.甲酰胺解聚法:破碎细胞同上,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合,再透析获得DNA可得DNA200kb左右。
3、三.玻璃棒缠绕法:用盐酸胍裂解细胞,将裂解物铺于乙醇上,然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅,DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。
4、四.异丙醇沉淀法:基本同1法,仅用二倍容积异丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在异丙醇中可溶状态)
5、五.表面活性剂快速制备法:用TritonX-100A或NP40表面活性剂破碎细胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。
6、六.加热法快速制备:加热96℃-100℃,五分钟,然后离心后取上清,可用于PCR反应。
7、七.碱变性快速制备:先用NaOH作用20分钟,再加HCI中和,离心后取上清,含少量DNA。
三、dna的提取方法
DNA的提取方法有7种:酚抽提法、甲酰胺解聚法、玻璃棒缠绕法、异丙醇沉淀法、表面活性剂快速制备法、加热法快速制备、碱变性快速制备。
2、核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子;
3、其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度;
4、其他核酸分子,如RNA,也应尽量去除。
四、DNA怎么提取
利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同,将二者分离,常用的方法是用1M氯纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA钠盐沉淀出来.
也可用0.15MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.
两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.
以稀盐酸溶液提取DNA时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA.
用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA.由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA.
苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。离心分层后取出水层,多次重复操作,再合并含DNA的水相,利用核酸不溶于醇的性质,用乙醇沉淀DNA。此时DNA是十分粘稠的物质,可用玻璃漫漫绕成一团,取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态.
利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA,然后将沉淀溶于水中,使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66%?80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.
五、怎样提取DNA
DNA提取是从细胞中分离和纯化DNA的过程。下面是一种常见的基本方法。
1.从含有DNA的样本(比如血液、细菌、植物等)中采集细胞并将其释放到一个离心管中。
2.加入细胞裂解液,用来破坏细胞壁和细胞膜,释放出细胞内的DNA。
3.加入蛋白酶,将细胞内的蛋白质降解掉。通常使用丝氨酸蛋白酶或蛋白酶K。
4.加入盐,使得DNA与其他细胞成分分离。盐可以使DNA形成一个粘稠的团块,从而方便分离和纯化。
5.加入冷酒精,使得DNA在酒精中沉淀并凝聚成片。通常使用70%的乙醇或异丙醇。
6.使用微量孔径滤器或离心机进行分离和纯化,去除其它杂质,使DNA得以分离和纯化。
1.在实验中使用的工具和材料要彻底消毒,以避免细菌和其他污染物的干扰。
2.在实验过程中要保持样品温度低,以防止DNA分解。
3.在实验过程中,不能使用过多的酒精或其他重质组分,否则DNA可能会被破坏。
OK,本文到此结束,希望对大家有所帮助。
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